本試劑盒是一種使用特別便捷的含有藍色和橙色染料(電泳位置分別約4kb和50bp)的2倍濃度的PCR預混液，含有2X Taq DNA Polymerase、2X PCR Buffer、2X dNTP和2X Loading Buffer等，只需加入大腸桿菌菌落或菌落稀釋物、引物和水即可進(jìn)行PCR擴增，并且擴增完畢后可以直接上樣電泳。本試劑盒主要適用于質(zhì)粒轉化大腸桿菌后陽(yáng)性克隆的菌落PCR篩選和鑒定。

本試劑盒對于大腸桿菌菌落的兼容性好。本試劑盒經(jīng)過(guò)反復優(yōu)化，確保直接挑取菌落進(jìn)行PCR的擴增效果良好，菌落的存在不會(huì )顯著(zhù)干擾PCR反應。

本試劑盒使用特別便捷。菌落直接PCR試劑盒中提供的E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)已經(jīng)含有所有的通用組分，用戶(hù)只需自備引物和水即可對大腸桿菌菌落進(jìn)行PCR擴增。它大大簡(jiǎn)化了PCR操作，使操作更加快捷，也減少了PCR操作過(guò)程中可能導致的污染，使PCR的重復性更好；同時(shí)E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)中已經(jīng)包含了上樣緩沖液組分，PCR擴增結束后即可直接上樣電泳，無(wú)需添加上樣緩沖液。

本試劑盒擴增效果好。本試劑盒可以擴增出長(cháng)達8kb的片段，但通常更適合用于擴增2kb以下的DNA片段。

本試劑盒中提供了雙色染料，便于電泳時(shí)觀(guān)察電泳進(jìn)程。本產(chǎn)品中加入了藍色和橙色的電泳示蹤染料(整體呈現綠色)，其在濃度為1%瓊脂糖膠中的遷移位置分別大約位于4kb和50bp處。PCR結束后可直接進(jìn)行電泳檢測，無(wú)需再添加上樣緩沖液。藍色和橙色示蹤染料不會(huì )影響對相應DNA條帶的觀(guān)察和檢測。

本產(chǎn)品穩定性高。經(jīng)測試，本試劑盒反復凍融15次后對PCR的擴增效果無(wú)顯著(zhù)影響。反復凍融15次前后，使用不同引物擴增100-1500bp間不同長(cháng)度目的片段的效果如圖1所示。

圖1. 本產(chǎn)品用于大腸桿菌菌落PCR的效果圖。特定質(zhì)粒轉化DH5α菌株后涂板，第二天挑取10個(gè)克隆，采用質(zhì)粒上的通用引物并使用本試劑盒進(jìn)行菌落PCR檢測。PCR擴增片段為1500bp左右。1-4，直接挑取克隆使用本試劑盒進(jìn)行PCR擴增；5-8，挑取克隆后加入到10μl水中混勻后取3μl用于本試劑盒的PCR擴增；9-10，本試劑盒反復凍融15次后直接挑取克隆進(jìn)行PCR擴增檢測。

每毫升E.coli Colony Direct PCR Mix (Green, 2X)若用于50微升的PCR反應體系，足夠用于40個(gè)反應；若用于20微升的PCR反應體系，足夠用于100個(gè)反應。

-20℃保存，至少一年有效。適當避免反復凍融。如需頻繁使用，可取適量存放于4℃，至少3天內有效。

由于PCR反應非常靈敏可以擴增目的基因序列超過(guò)1000萬(wàn)倍，在使用Fusion?酶時(shí)請注意避免微量待擴增DNA的污染，并盡量考慮設置不加模板的空白對照以確認是否有待擴增DNA的污染。

Taq DNA polymerase在PCR過(guò)程中每個(gè)循環(huán)的出錯幾率約為2.2×10^-5，對于大于1kb的DNA片段的克隆推薦使用出錯幾率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、Taq DNA polymerase等。對于普通的PCR或RT-PCR進(jìn)行定性或定量檢測，Taq DNA polymerase是最佳選擇。

盡管本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)15次反復凍融后仍具有和凍融前幾乎相同的PCR擴增效果，但仍宜適當避免反復凍融本產(chǎn)品，多次反復凍融可能使產(chǎn)品性能下降。

使用本產(chǎn)品前，一定要完全融化，并上下顛倒輕輕混勻后才能使用，盡量避免起泡。

本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。