LBA4404：                                                                 100μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )                    10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個(gè)月）
基因型
Ach5 (rif^R) Ti pAL4404 (strep^R) Octopine
產(chǎn)品說(shuō)明
LBA4404菌株為Ach5型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉運功能的章魚(yú)堿型Ti質(zhì)粒pAL4404，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pAL4404質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。 pAL4404型Ti質(zhì)粒含有篩選標簽：strep，賦予LBA4404菌株鏈霉素抗性，適用于菸草、番茄、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產(chǎn)的LBA4404化學(xué)轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入 冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉化效率較高，第一次使用前最好做預實(shí)驗確定所加質(zhì)粒的量），用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無(wú)抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天
（當平板只含有50 μg/ml kan 時(shí)，28℃培養48 h即可；平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時(shí)，需28℃培養60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養72-90 h）。