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GV3101電擊感受態(tài)細胞 ,根癌農桿菌電擊感受態(tài)

別名:
Cas號: 物化性質(zhì):
分子式: 熔點(diǎn):
分子量: 沸點(diǎn):
EINECS編號: 密度:
MDL號: 儲存條件:

GV3101 Elec:                                                             50μl/支
pCAMBIA2301(control vector,10ng/μl )                    10μl
保存條件(保質(zhì)期):                                         -80℃(12個(gè)月) 

基因型
C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline

產(chǎn)品說(shuō)明
GV3101菌株為C58型背景,核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無(wú)自身轉運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA),此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標簽:gent,賦予GV3101菌株慶大霉素抗性,適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司GV3101電轉感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉化:經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒 (size:11633 bp)檢測轉化效率>10cfu/μg DNA;經(jīng)pCAMBIA2301-ZH質(zhì)粒 (size:40 kb)檢測轉化效率可達5×10cfu/μg DNA。
 
操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘,待其融化,加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(體積不大于6ul,感受態(tài)轉化效率較高,第一次使用前最好做預實(shí)驗確定所加質(zhì)粒的量),用手撥打管底混勻,立即插入冰中,用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?;旌衔锟焖僖频诫姄舯?,蓋上杯蓋,空管保留待用。
3. 啟動(dòng)電轉儀,設置參數:C=25 μF,PC=200 ohm,V=2400 V(此參數為Biorad 推薦,使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作),將電擊杯快速放入電轉槽中,電擊完成快速插入冰中,加入700 μl無(wú)抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中,28℃振蕩培養2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養箱培養2-3天
(當平板只含有50 μg/ml kan 時(shí),28培養48 h即可;平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan,20 μg/ml rif 時(shí),需28培養60 h;如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28培養72-90 h)。
搜索質(zhì)檢報告(COA)
搜索MSDS
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GV3101電擊感受態(tài)細胞